一旦您的工艺规模超过半制备或制备型预装柱柱，您就需要在动态轴向压缩 (DAC) 柱中装柱我们的硅胶。在此，我们提供了一个用于装柱、测试和拆包我们最著名的硅胶之一的程序：粒度为 10 µm 的 C8-PK 系列（产品名称SP-100-10-C8-PK）。
计算所需的硅胶和体积
第一步是确定填料柱所需的硅胶和浆状溶剂量。您可以通过这些简单的计算来实现：
- 从空色谱柱和目标填料床的尺寸开始：
A mm I.D. xCmm L（内径 x 空色谱柱总长度）
A mm I.D. xBmm L（内径 x 目标床长度） - 确定色谱柱的总浆液容量以及目标填料床容积：
色谱柱总容量 (ml) =(A/2)2xπx(C/1000)
填料色谱柱容量 (ml) =(A/2)2x π x(B/1000) - 计算所需的固定相质量：
硅胶量（克） = 填料柱容量（毫升） x 硅胶密度（克/毫升）
SP-100-10-C8-PK 的密度为 0.58 克/毫升。
有关其他 DAISOGEL 相的堆积密度，请点击此处。
了解了塔的总浆料容量以及达到所需床层长度所需的二氧化硅量后，就可以准备浆料了。
泥浆制备
按照上面的计算方法，以克为单位称出适量的硅胶。虽然按重量计算至少应准备 50%的浆料，但我们强烈建议使用较稀的浆料，以获得最佳装柱效果：3 份浆料溶剂对 1 份硅胶。
举例说明，对于 SP-100-10-C8-PK，我们建议使用 600 毫升 2-丙醇和 200 克散装 C8-PK 硅胶，用于 50 毫米内径 x 200 毫米长的床层。但是，您必须确保浆液总量不超过上述计算的色谱柱总容量。否则，您可能需要向下调整 3:1 的比例，以确保浆液不会过量填充空柱。
对于小于 5 升的小容量泥浆制备，可在烧杯或玻璃瓶中制备。处理干硅胶和有机溶剂时一定要采取预防措施！推荐的个人防护设备包括合适的呼吸面罩、安全眼镜和手套。
1 份
硅胶
3 份
泥浆溶剂
充分混合溶液
硅胶是一种自由流动的细粉末，很容易飘散在空气中。它被认为是致癌物质，因此要小心处理。避免接触皮肤和眼睛，切勿吸入。
在通风良好的地方制备浆料，最好是在通风橱下。这有助于捕捉空气中的硅干粉并排出溶剂烟雾。始终遵守贵公司安全政策中规定的安全准则！
体积较小的硅胶可以用小桨叶手工搅拌。轻拿轻放二氧化硅！即使是 DAISOGEL 这样机械强度高的颗粒，如果用力过猛也可能会破裂。避免使用边缘锋利的金属铲或金属铲。适合使用塑料搅拌器或搅拌桨。充分混合硅胶和浆料溶剂，确保浆料均匀。
在装柱内径 30 厘米及以上的较大型 DAC 色谱柱时，需要较大的浆液容量。您需要一个更大的容器来准备浆液。硅胶与 2-丙醇的比例同样为 3:1。遵循与小容量泥浆制备相同的安全预防措施，但也要记住，在处理大容量硅胶和溶剂时，贵场所可能会有额外的安全预防措施。请向安全主任咨询。虽然可以使用桨叶手动混合较大体积的浆料，但也可以考虑使用温和的气动混合器来协助混合较大体积的浆料。一些 DAC 色谱柱供应商还提供包括槽和搅拌器在内的浆料制备系统。我们建议您遵循 DAC 色谱柱设备制造商的建议。
关于定义的说明
许多粒度分布较广的硅胶也需要在此阶段进行界定，以去除可能导致填料柱中背压过大的细小颗粒。
在典型的定义过程中，混合后让硅胶在烧杯或罐中 "沉淀 "15-30 分钟，然后从容器顶部浑浊的上清溶剂层中倾析出任何细粒。虽然这是许多硅凝胶（尤其是粒度较大或不规则的硅凝胶）的最佳做法，但由于 C8-PK 系列硅凝胶的单分散性，在初始装柱时不需要进行细化。不过，在拆开装柱后和重新装柱之前，我们建议对 C8-PK 系列的乏相进行两次定义。
如果需要彻底清洗废相，最好在反应器中重新搅拌凝胶，然后过滤。
装柱 DAC 色谱柱
准备好浆液后，就可以装柱色谱柱了。按照色谱柱制造商的说明，将浆液注入空色谱柱。
为了达到最佳填料效果，在将硅胶转移到色谱柱之前，不要让硅胶在浆液中沉淀。一旦将浆液注入色谱柱，应尽快开始填料，以避免沉淀（一两分钟内）。
按照色谱柱制造商的说明，将浆料轴向压缩成填料床。
请一如既往地佩戴安全眼镜和适当的个人防护设备！SP-100-10-C8-PK 应在活塞压力至少 70 巴、最高 100 巴的条件下进行填料。检查装柱过程中是否有泄漏，如果发现泄漏，请参阅色谱柱装置说明。确认床层长度符合预期。
如何确认色谱柱的效率
现在您的 DAC 色谱柱已经装柱完毕，在纯化原料药之前，您应该测试其性能。色谱柱效率通过样品测试注射进行测试。对于 SP-100-10-C8-PK，可以使用萘和甲苯等测试化合物，因为它们具有良好的紫外吸收性，在色谱柱上也有一定的保留。通常会进行两次效率计算。
填料柱的理论板数（N）描述了其分离效率，计算公式如下：
N = 5.54 x (tr)2/(w½)2
N = 理论板数
tr= 保留时间
w½= 峰半高宽度
第二种计算方法是峰不对称度，它可以反映洗脱出的测试化合物的峰形质量；高斯峰形表明色谱柱填充良好。不对称度的计算公式如下：
As= b/a
As= 峰不对称
b = 峰高 10% 时的右半峰宽
a = 峰高 10% 时的左半峰宽
如果理论板数 N 大于每米 35,000 板，且测试化合物峰的峰不对称度在 0.8 至 1.2 之间，则色谱柱通过效率测试。
内径 50 毫米 DAC 色谱柱效率测试条件示例：
- 用 600 毫升 2-丙醇稀释 200 克 SP-100-10-C8-PK，将稀释液转移到空色谱柱中，在 100 巴的压力下填料。这样，床层高度约为 20 厘米。
- 以 50 毫升/分钟的速度用 60% 甲醇或乙腈平衡色谱柱 4 至 5 个体积。
- 用 70% 甲醇配制 250 μl 测试注射样品。建议使用 1.8 mg/ml 的萘或 10 μl/ml 的甲苯。
- 确保进样时尽可能靠近色谱柱的头部，尽量减少死体积。同时确保紫外流动池尽可能靠近色谱柱的出口，以减少死体积。
- 进样后，用 60% 的甲醇或乙腈以 50 ml/min 的速度洗脱，直至出现峰值。
- 通过数据采集软件或用铅笔和尺子在色谱图打印输出上测量 N 和As。
混合测试化合物的色谱柱效率测试
拆开 DAC 色谱柱装柱并存放硅胶
拆包条件取决于硅胶的储存方式。如果希望干燥储存未装柱的硅胶，建议的程序是在用水适当清洗硅胶（如果需要除盐）后，用至少 4 CV 的高挥发性溶剂（MeOH 或 ACN）冲洗已装柱的色谱柱。请遵循 DAC 色谱柱设备制造商的开箱说明。
对于干硅胶的储存，可以在 70°C 左右的条件下，尽可能在层流罩下，将湿饼均匀地铺在宽板上，蒸发未装柱硅胶中的溶剂。将干硅胶装入有盖的瓶子中，室温下存放在湿度较低的地方。
如果希望将未装柱的硅胶湿润保存，建议的步骤是用至少 4 CV 的浆状溶剂（2-丙醇）冲洗装柱好的色谱柱。同样，请遵循 DAC 色谱柱设备制造商的拆包说明。将未装柱的湿硅石放入浆状溶剂（2-丙醇）中，储存在室温下的密闭容器中。
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