负责合成肽或重组肽下游加工厂的生产经理们非常清楚，填料层析柱的 CIP 是延长层析床使用寿命的 "必要之恶"。虽然 CIP 是人们希望尽可能避免的步骤，但它也是一种经济上重要的做法，可以降低原料药的生产成本。
对使用键合相硅胶填料的色谱柱进行 CIP 的注意事项
首先，也是最重要的考虑因素是 CIP 药剂，即使用何种化学药剂。当然，pH 值接近中性的温和化学品总是首选。不过，温和的药剂通常无法有效去除与粘合相紧密结合的污染物。使用有机溶剂清洗也有助于去除某些疏水性物质，但仅靠溶剂并不能对色谱柱进行深度 CIP。
如果 "温和 "的化学试剂和 "简单 "的纯溶剂试剂无法充分清洁和恢复色谱柱的性能，最后的办法通常是在有机溶剂存在的情况下使用 NaOH 水溶液。
对于基于 NaOH 的 CIP，我们建议如下：
- 在进行充分清洗的前提下，尽可能使用低浓度的 NaOH。较高浓度的 NaOH 会由于键合配体的损失而更快地缩短色谱柱的保留时间。
萘的保留时间
不同浓度的 NaOH 对由于键合配体流失而导致色谱柱保留时间缩短的影响。
- 在恢复色谱柱性能的同时，尽可能减少 NaOH CIP 的运行次数
- 同样，只有在运行了尽可能多的纯化循环后，才能启动首次苛性 CIP，同时仍能保持可接受的色谱柱性能。在纯化第五个周期后（或甚至在第十个周期后，如果您的 SOP 要求在每五个周期后进行 CIP，则无需进行首次 CIP）
- 不要根据您打算通过色谱柱的 NaOH 溶液量来确定 CIP 方法；相反，要根据二氧化硅与 NaOH 溶液的接触时间来确定清洗方法
- 用 NaOH 进行 CIP 后，立即用适当的酸性 pH 溶液清洗色谱床，中和色谱柱
- 在反冲洗/反向流模式下执行 CIP 步骤！
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