Os gestores de fabrico responsáveis pela unidade de processamento a jusante de péptidos sintéticos ou recombinantes sabem muito bem que a CIP de uma coluna de cromatografia embalada é um "mal necessário" para prolongar a vida útil do leito. Embora a CIP seja um passo que se pode querer evitar tanto quanto possível, é também uma prática economicamente importante que pode reduzir o custo de fabrico do seu API.
Considerações sobre a realização de CIP em colunas com um gel de sílica de fase ligada
A primeira e principal consideração é o agente CIP - qual o produto químico a utilizar. Naturalmente, é sempre preferível um produto químico mais suave com um pH mais próximo do neutro. No entanto, os agentes suaves não serão geralmente eficazes na remoção de contaminantes que estejam fortemente ligados à sua fase ligada. A lavagem com solvente orgânico também pode ser útil para remover certas espécies hidrofóbicas, mas o solvente por si só não resultará numa CIP profunda da coluna.
Se as opções de produtos químicos "suaves" e de solventes "simples" não conseguirem efetuar uma limpeza adequada e restabelecer o desempenho da coluna, o último recurso é geralmente uma solução aquosa de NaOH na presença de um solvente orgânico.
Para a CIP à base de NaOH, recomendamos o seguinte:
- Utilize uma concentração de NaOH tão baixa quanto possível, que ainda assim efectue uma limpeza adequada. Concentrações mais elevadas de NaOH reduzirão mais rapidamente o tempo de retenção da sua coluna devido à perda de ligandos ligados
Tempo de retenção do naftaleno
Efeito de diferentes concentrações de NaOH na rapidez com que o tempo de retenção da coluna diminui devido à perda de ligandos ligados.
- Efetuar a CIP com NaOH com a menor frequência possível, restaurando ao mesmo tempo o desempenho da coluna
- Do mesmo modo, só inicie a primeira CIP cáustica depois de terem sido executados tantos ciclos de purificação que mantenham um desempenho aceitável da coluna. Pode não ser necessário efetuar a CIP inicial até depois do ciclo de purificação número cinco (ou mesmo até ao ciclo dez, se o PON exigir a CIP após cada cinco ciclos)
- Não baseie o seu método CIP no volume de solução de NaOH que pretende passar sobre a coluna; em vez disso, baseie a limpeza no tempo de contacto da sílica com a solução de NaOH
- Após a CIP com NaOH, neutralizar IMEDIATAMENTE a coluna lavando o leito com uma solução de pH adequadamente ácido
- Efetuar a etapa CIP em modo de refluxo/fluxo inverso!
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