Los responsables de la planta de procesamiento de péptidos sintéticos o recombinantes saben muy bien que la limpieza in situ de una columna de cromatografía empaquetada es un "mal necesario" para prolongar la vida útil del lecho. Aunque la limpieza CIP es un paso que se quiere evitar en la medida de lo posible, también es una práctica económicamente importante que puede reducir el coste de fabricación de su API.
Consideraciones para realizar la limpieza CIP en columnas con gel de sílice en fase aglomerante
La primera y principal consideración es el agente CIP: qué producto químico utilizar. Por supuesto, siempre es preferible un producto químico suave con un pH cercano al neutro. Sin embargo, los agentes suaves no suelen ser eficaces para eliminar los contaminantes que están fuertemente ligados a la fase de enlace. El lavado con disolvente orgánico también puede ser útil para eliminar ciertas especies hidrófobas, pero el disolvente por sí solo no producirá una limpieza CIP profunda de la columna.
Si las opciones químicas "suaves" y "simples" con disolvente no consiguen realizar una limpieza adecuada y restaurar el rendimiento de la columna, el último recurso suele ser una solución acuosa de NaOH en presencia de disolvente orgánico.
Para el CIP basado en NaOH, recomendamos lo siguiente:
- Utilice una concentración de NaOH lo más baja posible que permita una limpieza adecuada. Concentraciones más altas de NaOH reducirán más rápidamente el tiempo de retención de su columna debido a la pérdida de ligandos enlazados.
Tiempo de retención del naftaleno
Efecto de diferentes concentraciones de NaOH sobre la rapidez con la que se reduce el tiempo de retención de la columna debido a la pérdida de ligandos enlazados.
- Ejecutar el CIP con NaOH con la menor frecuencia posible mientras se restablece el rendimiento de la columna.
- Del mismo modo, sólo inicie la primera CIP cáustica después de que se hayan realizado tantos ciclos de purificación como sea posible, manteniendo un rendimiento aceptable de la columna. Puede que no sea necesario realizar la primera limpieza cáustica hasta después del quinto ciclo de purificación (o incluso hasta el décimo ciclo si el PNT exige una limpieza cáustica cada cinco ciclos).
- No base su método CIP en el volumen de solución de NaOH que pretende pasar por la columna; en su lugar, base la limpieza en el tiempo de contacto de la sílice con la solución de NaOH.
- Después del CIP con NaOH, neutralizar INMEDIATAMENTE la columna lavando el lecho con una solución de pH ácido adecuada.
- Realice el paso CIP en modo de flujo inverso/lavado a contracorriente.
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